反复流产的遗传因素分析及其临床意义

[摘要]目的探讨反复流产的遗传因素分析的临床意义。方法2017年4月至2020年12月因反复流产在赣州市妇幼保健院就诊的246例患者为研究对象，取流产绒毛组织进行基因组拷贝数变异测序(CNV-seq)，统计患者染色体总异常率、染色体数目异常率和微缺失微重复异常率等。结果染色体总异常率为74.80%(184/246)，非整倍体异常结果中，发现常染色体多数以三体发生常见和性染色体异常以X单体为常见。染色体非整倍发生频率中，常染色体以16号染色体发生异常概率最高，占比22.55%(23/102)，其次为22-三体，占比11.76%(12/102)，X单体发生率为17.64%(18/102)。另外，三倍体有5例，检出率为2.03%(5/246)。微缺失微重复的检测结果发现，致病性和可能致病性一共13例，检出率为5.28%(13/246)，意义不明有64例，检出率为26.02%(64/246)。10例涉及两条以上的染色体微缺失微重复，提示父母染色体可能存在异常。结论染色体异常是反复流产的主要原因，进行遗传学检测对明确反复流产原因具有重要意义。

[关键词]反复流产；染色体异常；基因组拷贝数变异

反复流产是指妊娠早期因某种或多种因素引起胚胎发育自然停止致胚胎死亡的病理过程，其结局多为稽留流产或不全流产。近年来，我国不明原因反复流产发生率亦呈现逐年增加的趋势[1]，临床上目前尚无有效的治疗办法，并且一直是国内外基础与临床工作者研究的热点，同时也是难点之一。反复流产的发生给孕妇及家庭带来沉重的生理和心理负担，确定流产的潜在病因可以减少孕妇的自责，同时可以为二次妊娠管理提供有效指导，具有重要的临床意义。引起反复流产的病因多且复杂，包括遗传因素、免疫因素、内分泌因素和感染因素等，其中遗传因素是目前最受关注的领域[2]。CNV-seq是一种低深度的全基因组测序，可一次性筛选 46条染色体的非整倍体以及大于100kb的CNVs，并被广泛地应用于胎儿筛查、反复流产和临床未确诊的疾病中。本研究拟采用CNV-seq检测技术分析反复流产的遗传因素，现将研究情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入2017年4月至2020年12月因反复流产在赣州市妇幼保健院就诊的 246例孕妇，流产孕龄为 6至15周，平均为9周。纳入标准:①所有患者年龄大于18岁；②孕妇均签署知情同意书；③反复流产者符合《中华妇产科学》[3]诊断标准。排除标准: ①存在严重器质性病变；②存在子宫附件疾病等；③流产组织不足或质量差。

1.2 方法

清宫术后，选取约 5-10g新鲜、颜色透亮的绒毛组织，用 0.9％氯化钠溶液冲洗后冷冻保存送检。从流产组织中提取DNA，采用 CNV-seq 技术是基于BioelectronSeq 4000 高通量测序平台，按照标准流程操作进行。所有测定序列进行数据分析时，将其映射到hg19参考基因组，并参考相关数据库以确定微缺失微重复的意义[4]。

1.3 观察指标

根据检测结果，本研究对样本中染色体的总体异常率进行统计，并深入分析各个染色体在数量上的异常情况和结构上的异常情况。

1.4 统计学处理

采用 SPSS 19.0 统计学软件进行数据分析，并进行描述性分析。

2 结果

2.1分析246例病例发现染色体总异常率为74.80%(184/246)，非整倍体异常中，常染色体多数以三体发生常见和性染色体异常以 X 单体为常见。 染色体非整倍发生频率中，常染色体以16号染色体发生异常概率最高，占比22.55%(23/102)，其次为 22-三体，占比11.76% (12/102)，X 单体发生率为 17.64%(18/102)，见表1。此外，三倍体有5例，检出率为2.03%(5/246)。

2.2 反复流产微缺失微重复的检测结果中，疑似致病和致病性一共13例，检出率为5.28%(13/246)，见表2。其余意义不明的一共64例，检出率为26.02%(64/246)。

表1  各条染色体非整倍体发生情况

表2  基因组微缺失微重复检测结果

3 讨论

反复流产越来越引起人们关注，配子产生至受精发育一系列过程中，任何环节出错都会导致胚胎异常。研究发现染色体异常会增加DNA损伤和修复系统的负担，削弱细胞基因组的稳定性，进而诱发细胞凋亡，导致胚胎发育停滞、反复植入失败、反复流产以及出生缺陷[5]。染色体核型分析作为染色体诊断的金标准，能够识别染色体数目异常及大多数结构异常，然而，核型分析存在步骤复杂，分辨率较低，难以识别基因组中微小的变化。在分子生物学技术发展下，CNV-seq技术应运而生，能够一次性并行测定数十万至数百万条DNA分子序列。这种技术不仅实现了对全基因组的快速扫描，还高准确性、高通量、高灵敏度以及较低的运行成本的优势。

基于价格低、全基因组覆盖等一系列综合因素考虑，本研究选取246例反复流产患者为研究对象进行CNV-seq检测。染色体总异常率为74.80%，提示反复流产的主要原因为遗传因素。非整倍体异常结果发现，常染色体多数以三体发生常见和性染色体异常以 X 单体常见。 染色体非整倍发生频率中，常染色体以16号染色体发生异常概率最高，占比22.55%(23/102)，其次为 22-三体，占比11.76% (12/102)，X 单体发生率为 19.61%(20/102)。微缺失微重复的检测结果中发现，致病性和可能致病性一共13例，检出率为5.28%(13/246)，意义不明有64例，检出率为26.02%(64/246)。另外，我们注意到10例涉及两条以上的染色体微缺失微重复，提示父母染色体可能存在异常，需要进一步检测父母双方染色体，排除平衡易位的存在，这对指导夫妻双方生育具有重要意义。

综上所述，应用CNV-seq技术对反复流产进行遗传学异常检测具有较高的特异性。本研究也存在不足之处:一方面，标本量有限，可能影响统计效果，后期研究将进一步扩大样本量；另一方面，研究发现除了染色体异常导致的反复流产外，单基因致病性突变也逐渐成为人们探寻遗传病因的突破方向。

利益冲突声明:本文所有作者均声明不存在利益冲突。

参考文献

[1] Smith KJ, Johnson AD, Williams D, et al. Trends in pregnancy loss rates and associated risk factors amongwomen in the United States, 2000–2020[J]. Paediatric and Perinatal Epidemiology, 2023, 37(2):25-35.

[2] Tian S, Yu J,Zhang Y, et al. Overexpression of PTEN regulated by miR-19b and miR-494 in the villous ofrecurrent spontaneous abortion patients[J]. Journal of Reproductive Immunology, 2020, 140:103133.

[3] 曹泽毅. 中华妇产科学-上册[M]. 3版. 北京：人民卫生出版社，2014:15-16.

[4] 陈俊坤，胡莉琴，杨晶珍，等. 用高通量测序技术检测流产物染色体数目和拷贝数变异的研究[J]. 中华医学遗传学杂志，2018，35(4)：495-501.

[5] Ye C, Duan H, Liu M, et al. The value of combined detailed first trimester ultrasound-biochemical analysis for screening fetal aneuploidy in the era of non-invasive prenatal testing[J]. Arch Gynecol Obstet, 2023, 11(41):8-16.

基金项目:赣州市指导性科技计划(项目编号:GZ2019ZSF241)。